山羊LH elisa檢測試劑盒免疫檢測方法:
(一)夾心法:
可分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法。
雙抗體夾心法將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體;加入待測樣本,形成固相抗體-抗原復(fù)合物,洗滌后加入標(biāo)記特異性抗體并孵育,形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合的標(biāo)記抗體;加入不同的反應(yīng)物質(zhì)(如酶促底物、堿性溶液、氧化劑等),得到反應(yīng)信號。
雙抗原夾心法與雙抗體夾心法類似,將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗原;加入待測樣本,孵育使樣本中的抗原與固相抗體充分反應(yīng),形成固相抗原-抗體復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合物質(zhì);加入標(biāo)記特異性抗原并孵育,加入反應(yīng)物質(zhì),判讀結(jié)果。
(二)間接法:
間接法僅能檢測抗體,基本原理是將特異性抗原包被在固相載體上,加入待測樣本,形成固相抗原-受測抗體復(fù)合物;孵育洗滌后,加入標(biāo)記抗體。
(三)競爭法:
既檢測抗體,也可檢測抗原。
基本原理是先將抗小分子抗原的特異性抗體包被在固相載體上,然后同時加入待測樣本與標(biāo)記小分子,待測樣本中的小分子與標(biāo)記小分子競爭與固相抗體相結(jié)合,溫浴一定時間后洗滌加入不同的反應(yīng)物質(zhì),得到反應(yīng)信號。
(四)捕獲法:
可測定血清中某種特定的免疫球蛋白,目前主要用于IgM抗體的檢測。通常包被的固相抗體為針對IgM分子μ鏈的抗體,加入待測樣本后,特異及非特異的IgM抗體都會被固相抗體捕獲,之后加入能夠與特異性抗體結(jié)合的已知抗原,再加入能夠與已知抗原相結(jié)合的標(biāo)記抗體。隨后,通過孵育使標(biāo)記抗體與已知抗原充分結(jié)合,形成固相抗體-IgM-已知抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物。洗滌步驟再次進(jìn)行,以確保去除所有未結(jié)合的物質(zhì),減少背景噪音。接著,加入適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)物質(zhì),如酶底物,這些物質(zhì)在與標(biāo)記抗體中的酶反應(yīng)時會產(chǎn)生顏色變化或其他可檢測的信號。信號的強(qiáng)度與待測樣本中特異性IgM抗體的量成反比或正比(取決于具體的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和信號產(chǎn)生機(jī)制),從而允許定量或定性分析。
在解讀結(jié)果時,通常使用標(biāo)準(zhǔn)曲線作為參考,該曲線由一系列已知濃度的IgM抗體樣本生成,用于校準(zhǔn)和確定未知樣本中的抗體濃度。這種方法的高度特異性使得捕獲法成為診斷某些感染性疾病早期階段,尤其是當(dāng)IgM抗體首次出現(xiàn)時的重要工具。
山羊LH ELISA檢測試劑盒通過運(yùn)用夾心法、間接法、競爭法和捕獲法等多種免疫檢測技術(shù),提供了靈活且敏感的平臺,用于精確測量山羊體內(nèi)LH水平及相關(guān)免疫反應(yīng),對于生殖健康監(jiān)測、疾病診斷及科研研究具有重要意義。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,這些檢測方法將持續(xù)優(yōu)化,以滿足更廣泛、更深入的研究需求。