人NADH-細胞色素b5還原酶ELISA試劑盒雙抗體夾心法(檢測未知抗原) 

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。



2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。



3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。



4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。



5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml



6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。




若實驗結果呈現(xiàn)陽性，則需進一步確認其特異性及準確性。此時，可嘗試采用其他檢測方法如Western blot或質譜分析進行交叉驗證，以排除假陽性結果的可能性。同時，回顧實驗過程，確保每一步操作均嚴格按照說明書執(zhí)行，避免操作失誤導致的誤差。

此外，對于呈陰性的樣本，也不可掉以輕心。特別是在疾病早期或患者免疫力較低的情況下，抗原濃度可能過低，導致無法被試劑盒有效檢測。因此，對于疑似病例，建議結合臨床癥狀、病史及多種檢測結果進行綜合判斷。

在實驗結束后，及時整理實驗數(shù)據(jù)，記錄實驗過程中的關鍵步驟及觀察結果。對于異?；虿环项A期的結果，進行深入分析，找出可能的原因，并調整實驗方案或條件，以提高后續(xù)實驗的準確性和可靠性。

總之，人NADH-細胞色素b5還原酶ELISA試劑盒雙抗體夾心法作為一種靈敏、特異的檢測手段，在生物醫(yī)學研究中發(fā)揮著重要作用。然而，其結果的解讀需結合多方面因素，以確保準確性和可靠性。