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小鼠胚胎干細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏） 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠胚胎干細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）
種屬:ESF 158

類型:小鼠胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

形態(tài):球形*

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:mES完全培養(yǎng)液配方（600 ml）： DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ES級FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl（終濃度為1000U/ml） β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是小鼠胚胎干細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏） 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
吲哚-4-羧酸甲酯(>質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRMethyl indole-4-carboxylate  ELISAKitLyme-IgG人萊姆IgG規(guī)格：48T/96T  RatCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

甲基綠(~65%,BS)質(zhì)量規(guī)格：~65%,BSMethylene green  chloride double salt  小鼠Ⅵ型膠原α1(COL6α1)ELISA試劑盒 ，英文名： COL6α1 ELISA Kit  CLIAKitforHpt/HPELISAKit大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白規(guī)格：48T/96T

亞甲紫3RAX(>90%，BS)質(zhì)量規(guī)格：>90%，BSMethylene violet 3RAX  人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA檢測試劑盒HumanAndrogenBindingProtein,ABPELISAKit 96T/48T  細(xì)胞PAK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

2-甲基琥珀酸(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRMethylsuccinic acid  大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)試劑盒 Rat Pulmonary surfacta-associated protein A,SP-A ELISA Kit  β2-GP1IgA/G/M大鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M規(guī)格：48T/96T
小鼠粘蛋白2(MUC2)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC2 ELISA Kit  552-59-0櫻黃素說明書  Prunetin

白三烯C4(LTC4)ELISA檢測試劑盒MonkeyLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 96T/48T  491-80-5鷹嘴豆芽素A品牌  Biochanin A

犬球蛋白A(IgA)試劑盒 Canine Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit  509-18-2硬飛燕草堿規(guī)格  Belsoline

英文名稱HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorELISAkit人血小板源性生長因子(PDGF-AB)規(guī)格：96T/48T  10236-47-2柚皮苷   naringin

化微粒體1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性熒光定量檢測試劑盒20  480-41-1柚皮素說明書  Naringenin
25459-91-0去亞甲基小檗堿規(guī)格  Demethyleneberberine    英文名稱RatT4ELISAKit大鼠高敏甲狀腺素(T4)規(guī)格：96T/48T

25406-64-8莫諾苷品牌  Morroniside   英文名稱RatT4ELISAKit大鼠高敏甲狀腺素(T4)規(guī)格：96T/48T

24939-17-1去甲氧基姜黃素規(guī)格  Demethoxycurcumin  英文名稱RatT3ELISAKit大鼠三甲狀腺原氨酸(T3)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

24699-16-9異芒果苷   Isomangiferin   英文名稱RatT3ELISAKit大鼠三甲狀腺原氨酸(T3)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

24697-74-3鹽酸益母草堿說明書  Leonurine   英文名稱RatsubstancePreceptorELISAKit大鼠P物質(zhì)受體(SP-R)規(guī)格：96T/48T
小鼠胚胎干細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏） 小鼠脂蛋白a(Lpa)ELISA試劑盒 ，英文名： Lpa ELISA Kit  13241-33-3新橙皮苷規(guī)格  Neohesperidin

猴抗抗體(LMA)ELISA檢測試劑盒Monkeyai-livercellmembraneaibody,LMAELISAKit 96T/48T  27210-57-7新丹參酮   miltirone

犬凝聚素(CLU)試劑盒 Dog clusterin,CLU ELISA Kit  906-33-2新綠原酸說明書  Neochlorogenic acid

英文名稱HumanInsulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP2ELISAKIT人樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)規(guī)格：96T/48T  64809-67-2新芒果苷品牌  Neomangiferin

化人體RUNX3基因重組表達(dá)載體(pCMV5-RUNX3)10微克  93772-31-7新藤黃酸規(guī)格  Neogambogic acid
收到小鼠胚胎干細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏） 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。