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資源名稱　人臍細(xì)胞融合細(xì)胞
種屬:EA.hy926

類型:貼壁生長

形態(tài):CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，梭形，兩端細(xì)長

分離基物人臍細(xì)胞系EA.hy926是用聚乙二醇(PEG)將原代人臍細(xì)胞與耐硫鳥嘌呤的A 549*融合而成的。

提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費另計。

安全等級:1

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域電子顯微照片顯示了Weibel-Palade小體和組織特異性細(xì)胞器的細(xì)胞質(zhì)分布、生成、穩(wěn)態(tài)/形成、和等分化內(nèi)皮細(xì)胞功能的特征。

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%DMEM-H+10%FBS

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約3min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

生長特性:復(fù)蘇后前期增長緩慢，密度50%以后增殖很快。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

培養(yǎng)操作步驟：
人臍細(xì)胞融合細(xì)胞說明書產(chǎn)品僅用于科研1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用*化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。
以下是公司正在在熱銷的產(chǎn)品：
澤瀉醇C-23-醋酸酯;澤瀉醇C單乙酸酯質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Alisol C monoacetate   英文名稱MouseHeatShockProtein20ELISAKit小鼠熱休克蛋白20(HSP20)規(guī)格：96T/48T  大鼠脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)ELISA試劑盒 ，英文名： FABP4 ELISA Kit

香紫蘇內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Sclareolide  P高效液相色譜電化學(xué)定量檢測試劑盒20  The horse of major histocompatibility complex (MHC/ELA) ELISA Kit 馬主要組織相容性復(fù)合體(MHC/ELA)ELISA試劑盒

香紫蘇內(nèi)酯質(zhì)量規(guī)格：GC≥98%,BRSclareolide  Rabbitniicoxide,NOELISA試劑盒兔(NO)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  Mouseiercellularadhesionmolecule1,ICAM-1ELISAKIT 小鼠細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

3,4,5-三甲氧基肉桂酸(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR3,4,5-Trimethoxycinnamic acid  小鼠白介素1受體關(guān)聯(lián)激酶2(IRAK2)ELISA試劑盒 ，英文名： IRAK2 ELISA Kit  CLIAKitforHumanhistatin5,HTN5ELISAKit人富組蛋白規(guī)格：48T/96T
Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  54522-52-0甲基原薯蕷皂苷   Methyl protodioscin

載玻片細(xì)胞INSULIN蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  77-60-1劍麻皂苷元說明書  Tigogenin

Humanγ-glamylsysteinesyhetase,γ-ECSELISA試劑盒人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  458-37-7姜黃素品牌  Curcumin

小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA試劑盒 ，英文名： MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit  122-48-5姜酮規(guī)格  Zingerone

小鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP-5b)ELISA檢測試劑盒Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 96T/48T  94987-08-3絞股藍(lán)皂苷XLIX   Gypenoside XLIX
552-66-9大豆苷品牌  Daidzin   豬內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)試劑盒 Porcine Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit

552-59-0櫻黃素說明書  Prunetin  豬內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)試劑盒 Pig Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA KIT

552-59-0櫻黃素   Prunetin  豬內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)試劑盒 Pig Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol   豬內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)ELISA檢測試劑盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cadELISAKit 96T/48T

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol  豬緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)試劑盒 Pig Angiotensin conveing enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
人臍細(xì)胞融合細(xì)胞說明書犬β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA檢測試劑盒CanineBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T  104-46-1反式茴香腦品牌  Anethole

犬胸腺肽α1(Thymosin α1)試劑盒 Canine Thymosin α1 ELISA Kit  33889-68-8防己諾林堿規(guī)格  Fangchinoline

英文名稱HumaissuefactorELISAKit人組織因子(TF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  518-34-3粉防己堿   Tetrandrine

超敏型HRP-TMB底物顯色試劑盒10/50  19906-72-0蜂斗菜內(nèi)酯說明書  Bakkenolide

Ratglucocoicoid,GCELISA試劑盒大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  484-20-8佛手柑內(nèi)酯品牌  Bergapten；5-Methoxypsoralen
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線