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牛骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　牛骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)
種屬:BSMSCs

類型:貼壁生長

形態(tài):上皮細胞樣，細胞為不規(guī)則形態(tài)，有梭形，密度大時緊密排列成鋪路石樣排列。

分離基物牛，

提供形式:T25細胞培養(yǎng)瓶/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS,1%-1.5%雙抗

傳代方法:傳代比例是：1:2-1:3.

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲條件:90%FBS+10%DMSO 液氮
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是牛骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
粘蛋白質(zhì)量規(guī)格：Type I-S; from bovine submaxillary glandsMucin from bovine submaxillary glands  ELISAKitPLAP人胎盤堿性1酸酶規(guī)格：48T/96T  類白細胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒 ，英文名： HLA-B27 ELISA Kit

N,N'-二琥珀基碳酸酯(>98%,EP)質(zhì)量規(guī)格：>98%,EPN,N'-Disuccinimidyl carbonate (DSC)  小鼠膽囊收縮素B受體(CCKBR)ELISA試劑盒 ，英文名： CCKBR ELISA Kit  RatCollageypeⅡ,ColⅡELISA試劑盒大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

滂胺天藍(~50%,BS)質(zhì)量規(guī)格：~50%,BSChicago sky blue 6B  人神經(jīng)髓鞘蛋白(p2)ELISA檢測試劑盒Humanmyelinprotein2,p2ELISAKit 96T/48T  HumanCyclicguanosinemonophosphate,cGMPELISA試劑盒人環(huán)1酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氯銨-T三水(>質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRChloramine T, trihydrate  大鼠母親DPP同源物4(Smad 4)試劑盒 Rat mothers against decapeaplegic homolog 4,Smad4 ELISA Kit  HumanGlucagon，GCELISAKit人胰素(GC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細胞INSULI-ALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  11013-97-1甲基橙皮苷規(guī)格  Methyl hesperidin

humanβ-tubulin,TUBBELISA試劑盒人β-微管蛋白(TUBB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  38763-29-0甲基黃連堿   Worenine

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)ELISA試劑盒 ，英文名： TGFα ELISA Kit  2292-16-2甲基蓮心堿說明書  Neferine

小鼠葡萄糖依賴性釋放多肽(GIP)ELISA檢測試劑盒MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit 96T/48T  74805-92-8甲基麥冬二氫高異黃酮A品牌  Methylophiopogonanone A

人抗SS-A/Ro抗體試劑盒 Human SS-A/Ro aibody ELISA kit  74805-91-7甲基麥冬二氫高異黃酮B規(guī)格  Methylophiopogonanone B
55481-88-4大葉茜草素規(guī)格  Mollugin   豬生成素2(ANG-2)試劑盒 Porcine ANG-2 ELISA Kit

55466-05-2酸棗仁皂苷B說明書  Jujuboside B  豬生成素2(ANG-2)ELISA檢測試劑盒PorcineAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit 96T/48T

55466-04-1酸棗仁皂苷A   Jujuboside A  豬生成素1(ANG-1)試劑盒 Porcine ANG-1 ELISA Kit

553-21-9木香烴內(nèi)酯規(guī)格  Costundide  豬生成素1(ANG-1)ELISA檢測試劑盒PorcineAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 96T/48T

55297-87-5法卡林二醇說明書  Bitte angeben     豬內(nèi)皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA檢測試劑盒PorcineVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit 96T/48T
牛骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)犬5羥色胺(5-HT)ELISA檢測試劑盒Canine5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit 96T/48T  65604-80-0麥冬皂苷D'品牌  ophiopogonin D'

犬水通道蛋白5(AQP5)試劑盒 Dog aquaporin-5,AQP5 ELISA kit  57-87-4甾醇規(guī)格  Ergosterol

英文名稱HumanLBPELISAKit人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)規(guī)格：96T/48T  479-91-4蔓荊子黃素   Vitexicarpin

超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50  88105-29-7三七皂苷Fe說明書  Notoginsenoside Fe

RatHeatShockFactor1,HSF1ELISA試劑盒大鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  冬青素A品牌  Ilexgenin A
收到牛骨骼肌衛(wèi)星細胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。