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細胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細胞之方法：
人氣道上皮細胞說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人氣道上皮細胞說明書
種屬:HBE135-E6E7

類型:貼壁生長

形態(tài):上皮細胞樣

提供形式:T25培養(yǎng)瓶細胞/凍存管

安全等級:2

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域This cell line may be used as a reference in cDNA microarray studies to demonstrate lung cancer profiles correlating with clinical outcome or biology of tumors. RefWigle DA, et al. Molecular profiling of non-small cell lung cancer and correlation with disease-free survival. Cancer Res. 62: 3005-3008, 2002. PubMed: 12036904 

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲條件:90%FBS+10%DMSO 液氮

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人氣道上皮細胞說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人氣道上皮細胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
紫丁香酚苷（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Syringin  英文名稱MouseFXELISAKit小鼠凝血因子X(FX)規(guī)格：96T/48T  大鼠粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit

竹節(jié)參皂苷IVa（標準品）質(zhì)量規(guī)格：供含量測定用chikusetsu saponin Iva  VMA高效液相色譜電化學(xué)定量檢測試劑盒20  人β血小板球蛋白/β環(huán)蛋白(β-TG)ELISA檢測試劑盒Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit 96T/48T

毛蘭素（標準品）質(zhì)量規(guī)格：供含量測定用3'-Hydroxy-3,4,4',5-tetraMethoxybibenzyl  Rabbitplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISA試劑盒兔纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  大鼠白介素6(IL-6)試劑盒 Rat Ierleukin 6,IL-6 ELISA KIT

石斛酚（標準品）質(zhì)量規(guī)格：鑒別dendrophenol  小鼠白介素17(IL-17)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  CLIAKitfoGF-Beta1(MouseansformingGrowthfactorBeta1)ELISAkit小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1規(guī)格：48T/96T
山羊主要組織相容性復(fù)合體(MHC/OLA)ELISA檢測試劑盒Goatmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/OLAELISAKit 96T/48T  70553-76-3蝙蝠葛蘇林堿   Daurisoline 

犬前體蛋白(TpP)試劑盒 Canine thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit  524-17-4蝙蝠葛堿說明書  Dauricine 

英文名稱Mouse14-3-3proteinELISAKit小鼠14-3-3蛋白(14-3-3pro)規(guī)格：96T/48T  1258-84-0扁塑藤素品牌  Pristimerin

腸集聚型大腸埃希菌(EeroaggregativeE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20  572-30-5扁蓄苷規(guī)格  Avicularin

RatGamma-aminobyricacid,GABAELISA試劑盒大鼠γ氨基(GABA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  524-17-4蝙蝠葛堿   Dauricine
873001-54-83,29-二苯甲酰基栝樓仁三醇   3,29-Dibenzoyl Rarounitriol   組織毒1蛋白酶(HIV-1PROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒20

87205-99-0二氫丹參酮Ⅰ說明書  Dihydrotanshinone I   組織毒1蛋白酶(HIV-1PROTEASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

86639-52-37-乙基-10羥基喜樹堿說明書  7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin   組織β-內(nèi)酰胺酶報告基因活性熒光定量檢測試劑盒20

866366-86-1噻嗪二酮苷規(guī)格  Xanthiside   組織β氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)活性比色法定量檢測試劑盒20

86632-03-33,4,5-三咖啡?？鼘幩崞放?/span>  3,4,5-Tricaffeoylquinic acid   組織α-L-巖藻糖苷酶(AFU)比色法定量檢測試劑盒20
人氣道上皮細胞說明書RatFibrinogenDegradationProduct,FDPELISA試劑盒大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  201-482-7豆甾醇   Stigmasterol

小鼠組織金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP1)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP1 ELISA Kit  303-45-7棉酚說明書  Gossypol

綿羊白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測試劑盒SheepIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 96T/48T  12542-36-8醋酸棉酚品牌  Gossypol acetic acid

犬胰素樣肽1(GLP1)試劑盒 Dog glucagon like peptide 1,GLP1 ELISA Kit  6812-81-3櫟癭酸規(guī)格  Roburic acid

英文名稱MouseAdenosineiphosphataseELISAKit小鼠ATP酶規(guī)格：96T/48T  81907-62-2靈芝酸A   Ganoderic acid A