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黑化大家鼠形態(tài)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　黑化大家鼠形態(tài)
種屬:NRm

形態(tài):成纖維細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:M-199:withEarle＇sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是黑化大家鼠形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
SkMC Pellet 人骨骼肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人基質(zhì)細(xì)胞cDNAHHGMC cDNAN-芐基甘酸乙酯，英文名或英文縮寫：N-Benzylglycine etxyl ester，級(jí)別：BR，97%，規(guī)格：25克

CL-0090Hacat(人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞)5×106cells/瓶×2膽堿氧化酶 Choline oxidase (≥10 units/mg) 9028-67-5 50UN 通用試劑

MBL2 Others Human 人 MBL2 / MBL / COLEC1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N-alpha-芴氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色安醋 Fmoc-Trp(Boc)-OH 14384-78-6

人神經(jīng)細(xì)胞裂解物HNLL-pxenYLALANINEL-本美國(guó)藥典級(jí)5kg

牛腎細(xì)胞;MDBK 人咽鱗癌細(xì)胞，FaDu細(xì)胞 Nb2-11細(xì)胞，小鼠瘤細(xì)胞硅酮　OV-7Silicone OV-7
4. 細(xì)胞系統(tǒng)避蚊胺(99%)DEET質(zhì)量規(guī)格：0.99

CL-0439SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2特丁通(標(biāo)準(zhǔn)品)Terbumeton質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠外膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL噻呋酰胺(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%)Thifluzamide質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%

4T1 小鼠癌細(xì)胞速滅威(標(biāo)準(zhǔn)品)Tsumacide質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

ECM1 Others Mouse 小鼠 ECM1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 特丁津(標(biāo)準(zhǔn)品)Terbuthylazine質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
HLF-a(人肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 藤黃微球菌/騰黃八疊球菌胺藍(lán)Oshēng huà shì jì容量：2～8°C1克

管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2,3-二氧基本全 2,3-Dimqthoxybqnzcldqhydq 86-21-1

FGF2 Others Human 人 VEGF121 / VEGF-A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 炭疽桿菌shēng huà shì jì容量：1米

人非小細(xì)胞;NCI-H2087霧抑制劑shēng huà shì jì容量：2～8℃1毫克

CCD-1095Sk細(xì)胞，皮膚細(xì)胞 人細(xì)胞,HHCC細(xì)胞 CL-0176OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×252092-43-02-溴-4-硝基　N-氧，97%2-Bromo-4-nitnopyridine 1-oxide
黑化大家鼠形態(tài)AMY2A Others Human 人 AMY2A / Alpha-amylase 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 膽戊基碳酸酯Cholesterol Amyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：

人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL膽正辛基碳酸酯Cholesterol n-Octyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：

NFS-60細(xì)胞，小鼠細(xì)胞G-CSF依賴性 HeLa [ Chang Liver ](張氏肝細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞;BS-C-1膽己基碳酸酯Cholesterol Hexyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：

XCL2 Protein Human 重組人 XCL2 蛋白 (His 標(biāo)簽)4-(4-乙氧苯氧羰基)苯基碳酸戊酯(>95.0%(HPLC))Amyl 4-(4-Ethoxyphenoxycarbonyl)phenyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)

PK-15(豬腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured)碳酸丁基4-羧苯酯(>98.0%(T))Butyl 4-Carboxyphenyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)
收到黑化大家鼠形態(tài)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。