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細胞培養(yǎng)過程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細胞之方法：
人上皮細胞說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人上皮細胞說明書
種屬:16HBE

類型:貼壁生長

形態(tài):CM1-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細胞樣，多角形，緊密排列

分離基物SV40轉(zhuǎn)化；男性，細胞

提供形式:凍存管/T25培養(yǎng)瓶

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約5min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

生長特性:低密度時細胞成塊生長，類似長條形，細胞之間間隙不明顯；高密度時細胞是多角形，緊密排列。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人上皮細胞說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人上皮細胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
REG1A Others Rat 大鼠 REG1A / PSPS 人細胞裂解液 (陽性對照) 1酸美托洛爾（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品Metoprolol tartrate

人卵巢微內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL阿拉伯膠質(zhì)量規(guī)格：>99%,醫(yī)藥級Arabic gum

P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]細胞，小鼠細胞 SRSV/3T3(SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞) 人正常上皮細胞;RWPE-1匹格列酮鹽酸鹽（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Pioglitazone HCl

CXCL9 Protein Human 重組人 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白苯噻啶蘋果酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRPizotifen Malate

RWPE1(人上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 人 SMR3B 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸多粘菌素B質(zhì)量規(guī)格：>6500 IU/mg,USP30Polymyxin B Sulfate
CD3E Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3e / CD3 epsilon 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸達泊西汀(混旋)質(zhì)量規(guī)格：>99%,混旋Dapoxetine

小鼠肝動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL鹽酸達泊西汀(右旋)質(zhì)量規(guī)格：>99%,右旋Dapoxetine

HCAEC人內(nèi)皮細胞 HCAEC in human coronary artery endothelial cells ECM(Sicencell Cat#1001)固K鹽質(zhì)量規(guī)格：>80%,BRFast Black K Salt

IL11 Protein Human 重組人 IL11 / Ierleukin 11 / IL-11 蛋白氨基10B質(zhì)量規(guī)格：ARAmido black 10B

RKO-E6(人轉(zhuǎn)基因細胞) 5×106cells/瓶×2 Jecket(瘤細胞)1-癸烷磺酸鈉[離子對色譜級]質(zhì)量規(guī)格：離子對色譜用試劑IPC-ALKS-10
人細胞;A-427 [A427]TOLUIDInepLUEOCERTIFIED胺藍O生物染料級100G92-31-9RT

tTA基因修飾的小鼠*癌細胞(B類);Pan02-CAG-tTA-2D1 木瓜蛋白酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL2-二安基基本酚;2-羌基-N,N-二基芐安 2-DiMqthylcMinoMqthylphqnol 10-62-0

SP2/0, 小鼠細胞 MouseTESwo7iumSALTTES, 鈉鹽超級25G70331-82-7RT

CR2 Others Human 人 CD21 / CR2 / C3DR 人細胞裂解液 (陽性對照) TRIS1.0MPH7.5STERILETris溶液超級500MLRT

人少突膠質(zhì)前體細胞RNAHOPC miRNA5 μg8-Azaguanine 1vial/1vial*5 Sigma A5284
人上皮細胞說明書SDF2 Others Mouse 小鼠 SDF2 / SDF-2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 反油酸（標準品）Elaidic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,≥99.0% (GC)

小鼠細胞;Fox-NY十七碳酸（標準品）Heptadecanoic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

SK-OV-3細胞，細胞 人細胞系,HS-746T細胞 豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4十七碳酸（98%）Heptadecanoic acid質(zhì)量規(guī)格：0.98

tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-4D6隱色孔雀石綠（標準品）Leucomalachite Green質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/turkey/Turkey/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 二十酸甲酯（標準品）Methyl Arachidate質(zhì)量規(guī)格：≥98.0%(GC)