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綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞培養(yǎng)
種屬：U14-GFP

形態(tài)：上皮樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS；G418200ug/ml

傳代方法：1:3傳代；2~3天1次。

生長特性：貼壁生長

存儲條件：基礎培養(yǎng)基：+5%DMSO+20%FBS
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞培養(yǎng)的相關熱銷產(chǎn)品：
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY10221-氨基蒽(>98.0%(GC)(T))1-Aminoanthracene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)

CNE細胞，人細胞 鼠細胞,SP2/0-Ag14細胞 恒河猴皮膚細胞;RM-S19-溴蒽(>95.0%(GC))9-Bromoanthracene質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

NAMALWA(人Butt's瘤細胞) 5×106cells/瓶×22'-脫氧鳥苷-13C,15N22'-Deoxyguanosine-13C,15N2質(zhì)量規(guī)格：美國進口

Promocell C-24110 Melanocyte Growth Medium KIT, 色素細胞生長培養(yǎng)基套裝 500mlO6-[4-(氨甲基)芐基]鳥嘌呤O6-[4-(Aminomethyl)benzyl]guanine質(zhì)量規(guī)格：美國進口

色素細胞生長生長添加物MelGS阿糖鳥嘌呤水合物Ara-G hydrate質(zhì)量規(guī)格：美國進口
NCI-H520[H520]細胞，人細胞 人細胞,EJ細胞 人心肌細胞HCM氯吡脲；氯吡苯脲；吡效隆質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRForchlorfenuron,4-CPPU,CPPU,KT-30

長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細胞;201184醋酸鎂四水(分子生物學級)質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學級Magnesium acetate, tetrahydrate

MMP9 Others Human 人 MMP-9 / CLG4B 人細胞裂解液 (陽性對照) 萘丁美酮/萘普酮（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Nabumetone

CM-R060大鼠腎動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL地瑞拉韋質(zhì)量規(guī)格：>98%Darunavir

JAM3 Others Human 人 JAM3 / JAM-C 人細胞裂解液 (陽性對照) 沃氏物質(zhì)量規(guī)格：含量≥85%Methoxydienone
人耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16朝藿定A1(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Epimedin A1

DLL1 Others Human 人 DLL1 / Delta-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 朝藿定B（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Epimedin B

豚鼠皮膚細胞;GP-S2朝藿定C（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Epmedin C

NRP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 人細胞裂解液 (陽性對照) 橙黃決明素(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Aurantio-obtusin

腦動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)常山酮 質(zhì)量規(guī)格：提取含量5%以上Halofuginone
綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞培養(yǎng)腦膜細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)青霉素G鈉鹽Penicillin G,  salt 質(zhì)量規(guī)格：>1500U/mg,USP,BR

大鼠主動脈平滑肌細胞 非洲青猴腎細胞，COS-7細胞 CBRH-7919(細胞)青霉素G鈉(標準品)Penicillin G,  salt 質(zhì)量規(guī)格：效價測定

人纖維細胞;HT-1080米格列奈鈣Mitiglinide calcium Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

TNFRSF10D Others Human 人 AILR4 / TNFRSF10D / DCR2 / CD264 人細胞裂解液 (陽性對照) 米格列奈鈣(標準品)Mitiglinide calcium Hydrate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

少突膠質(zhì)細胞生長添加物OGS丙基硫氧嘧啶 /6-正丙基-2-硫代尿嘧啶Propylthiouracil質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
收到綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。