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細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

產(chǎn)品僅用于科研冷凍保存細(xì)胞之方法：
人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞Daoy（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞Daoy（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書
種屬：Daoy

類型：結(jié)締組織增生性小腦髓母細(xì)胞

形態(tài)：多邊形

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 Daoy 完全培養(yǎng)基：配方（100 ml）： EMEM (Invitrogen, 11090081) 90 ml FBS (Biochrom, S4115) 10 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
產(chǎn)品僅用于科研一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞Daoy（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。
以下是人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞Daoy（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
RK2 Others Human 人 RK2 / k-B / KB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2-(4-甲氧苯基)-4,6-雙(三氯甲基) -1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))2-(4-Methoxyphenyl)-4,6-bis(trichloromethyl)-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

恒河猴胚腎細(xì)胞;FRhK-4 [FRhK4]三苯基溴化锍(>98.0%(T))Triphenylsulfonium Bromide質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

AFM Others Human 人 AFM / Afamin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪6-Bromoimidazo[1,2-a]pyrazine質(zhì)量規(guī)格：>98%

小腸平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)1,2-1,2-Propanediol質(zhì)量規(guī)格：AR,分析

NCI-H209細(xì)胞，人小細(xì)胞 人癌抗雌激素耐藥株,LCC9細(xì)胞 上皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加物MEpiCGSTBB(4,5,6,7-四溴-1H-苯并三唑)TBBT;NSC 231634質(zhì)量規(guī)格：>98%,蛋白激酶抑制劑
NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 MDA-MB-231(癌細(xì)胞)氨芐西林/氨芐青霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Ampicillin Trihydrate

CL-0424RK1(大鼠腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2阿替美唑鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRAtipamezole HCl

ICOSLG Others Human 人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 阿替美唑鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Atipamezole HCl

人內(nèi)根殼細(xì)胞RNAHHIRSC miRNA5 μg阿糖胞苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Cytarabine

QBC939細(xì)胞，人細(xì)胞 褐鼠胰島素瘤上皮細(xì)胞,RIN-m細(xì)胞 NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系達(dá)卡巴嗪質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP31,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Dacarbazine
人羊膜上皮細(xì)胞RNAHAmEpiC miRNA5 μg雌激素酮硫酸鹽，去氫表雄酮硫酸鈉質(zhì)量規(guī)格：>98%Dehydroepiandrosterone-3-sulfate

SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 纈更昔洛韋鹽酸鹽 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USPValganciclovir

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1肌醇質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRInositol

CL187/CCL187細(xì)胞，人細(xì)胞 人色素瘤細(xì)胞,M14細(xì)胞 人細(xì)胞;RPMI-8226 [RPMI8826]肌醇(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Inositol

Hela(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×24'-羥基氟比洛芬質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口4'-Hydroxy Flurbiprofen
人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞Daoy（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書HCMEC-c 人類*微內(nèi)皮細(xì)胞(HCMEC) 500,000cells 腦平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)（標(biāo)準(zhǔn)品）Hydrocortisone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)富馬酸伊布利特Ibutilide fumarate 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

SORCS1 Others Human 人 SORCS1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 富馬酸伊布利特(標(biāo)準(zhǔn)品)Ibutilide fumarate 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

Oregon vole 俄勒岡地鼠硫酸異帕米星Isepamicine Sulphate質(zhì)量規(guī)格：含量≥670μg/mg

豬腎細(xì)胞;PK(15)蓓薩羅丁;貝沙羅汀Bexarotene質(zhì)量規(guī)格：>99%