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小鼠骨樣細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠骨樣細胞培養(yǎng)
種屬:MLO-Y4

提供形式:T25細胞培養(yǎng)瓶/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:85%高糖DMEM+15%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

生長特性:貼壁生長

存儲條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是小鼠骨樣細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系3-磺炳基十六烷基二甲甜菜堿3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate(SHDAB)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞(彝族);HYL 人腹膜內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLDBD-ED [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(2-氨基乙基氨基)-2,1,3-苯并惡二唑]DBD-ED [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(2-aminoethylamino)-2,1,3-benzoxadiazole] 質(zhì)量規(guī)格：用于高效液相色譜標記

牛腦垂體提取物BPEAABD-SH (=4-乙酰氨基-7-巰基-2,1,3-苯并惡二唑](>94.0%(HPLC))AABD-SH (=4-Acetamido-7-mercapto-2,1,3-benzoxadiazole) 質(zhì)量規(guī)格：>94.0%(HPLC)

EPHB2 Others Mouse 小鼠 EphB2 / Hek5 人細胞裂解液 (陽性對照) 9-(溴甲基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T))9-(Bromomethyl)acridine 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

人細胞;SF17DBD-COCl [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(T))DBD-COCl [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-2,1,3-benzoxadiazole]質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)
TNFSF11 Others Mouse 小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細胞裂解液 (陽性對照) 十八烷基三甲基氯化銨質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRStearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC)

小鼠頜下腺上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL十烷基三甲基氯化銨質(zhì)量規(guī)格：>99%Decyltrimethylammonium chloride

L W-3A小鼠皮下結(jié)締組織細胞 L W-3A mice subcutaneous connective tissue cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS辛基三甲基氯化銨;八烷基三甲基氯化銨質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRTrimethyloctylammonium chloride

IL1A Protein Mouse 重組小鼠 IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 蛋白DMS質(zhì)量規(guī)格：BRDMS

P3X63Ag8.653(小鼠細胞) 5×106cells/瓶×2 L6(大鼠成肌細胞)D-正亮氨酸(>99%,BC)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BCD-Norleucine
CM-R034大鼠肝動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL1-氮雜-15-冠-5-(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)1-Aza-15-crown 5-Ether

SGC-7901/VCR細胞，人耐VCR胃腺癌細胞 人神經(jīng)細胞,BT-325細胞 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-71-氮雜-18-冠-6-(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)1-Aza-18-crown 6-Ether

COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞) 5×106cells/瓶×21-氮雜-12-冠4-(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)1-Aza-12-crown 4-Ether

CA12 Others Human 人 CA12 人細胞裂解液 (陽性對照) 4'-乙酰苯并-15-冠-5-(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)4'-Acetylbenzo-15-crown 5-Ether

人胎兒胸腺細胞株;HFT-8810 [HFT8810]1,3-二氨基胍鹽酸鹽 質(zhì)量規(guī)格：>98%1,3-Diaminoguanidine Mono
小鼠骨樣細胞培養(yǎng)細胞名稱 種屬外消旋α-羥基布洛芬rac α-Hydroxy Ibuprofen質(zhì)量規(guī)格：美國進口

REG4 Others Mouse 小鼠 REG4 / GISP / RELP 人細胞裂解液 (陽性對照) (R)-布洛芬(R)-Ibuprofen質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小鼠成纖維細胞(EGFP標記)(S)-布洛芬(S)-Ibuprofen質(zhì)量規(guī)格：美國進口

ICAM2 Others Mouse 小鼠 ICAM-2 / CD102 人細胞裂解液 (陽性對照) 依那普利Enalapril質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人間充質(zhì)干細胞-骨髓RNAHMSC-bm miRNA5 μg1,3-二芐基-5-氟尿嘧啶1,3-Dibenzyl-5-fluorouracil質(zhì)量規(guī)格：美國進口
收到小鼠骨樣細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。