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人細(xì)胞培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人細(xì)胞培養(yǎng)
種屬：A549（A-549）

類型：貼壁生長

形態(tài)：上皮樣細(xì)胞

分離基物：人，肺

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：90%高糖DMEM+10%FBS

生長條件：95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲條件：50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
腦動脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)苝(升華提)(>99.0%(GC))Perylene (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)

CA46細(xì)胞，人Butts瘤細(xì)胞系 小鼠Lewis瘤株,LLT細(xì)胞 人肝臟星形細(xì)胞裂解物HHSteCL1,1,4,4-四苯基-1,3-丁二1(>99.0%(HPLC))1,1,4,4-Tetraphenyl-1,3-butadiene質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)

NCI-H295R(人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×28-羥基米氮平β-D-葡萄糖苷酸8-Hydroxy Mirtazapine β-D-Glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CCRF-CEM(人急性細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0094HCC827(人非小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠樹突狀細(xì)胞低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP8-羥基米氮平8-Hydroxy Mirtazapine質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前細(xì)胞;MFC-GFPN,N-二乙酰 去-5'-氯-4-氟代芐基莫沙必利N,N-Diacetyl Des-5'-chloro-4-fluorobenzyl Mosapride質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
SK-BR-3細(xì)胞，人癌細(xì)胞 草魚腎細(xì)胞系,GIK細(xì)胞 肺大平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)氯己定(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%Chlorhexidine

WL1(大鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2香茅醇(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC) β-Citronellol

NHDF Pellet 正常人皮膚成纖維細(xì)胞團(tuán)塊(少年者) > 1 mio.cells 1酸(pNPP)1酸酶檢測試劑盒pNPP多菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%Carbendazim solution

CL-0251MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Cbz-L-蘇氨酸芐酯質(zhì)量規(guī)格：0.98N-Cbz-L-threonine Benzyl Ester

OLR1 Others Rat 大鼠 OLR1 / LOX1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (+)-2-甲基-L-絲氨酸質(zhì)量規(guī)格：0.99(+)-2-Methyl-L-serine
Hut-102(人皮膚T瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2(R)-(+)-4'-羥苯基卡維地洛質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口(R)-(+)-4'-Hydroxyphenyl Carvedilol

Promocell C-22020 Endothelial Cell GrowthMedium MV, 內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基MV(即用型) 500ml4'-芐氧基卡維地洛質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口4'-Benzyloxy Carvedilol

人食道上皮細(xì)胞裂解物HEEpiCL卡維地洛-甲基-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Carvedilol-methyl-d3

HEXA Others Human 人 Hexosaminidase A / HEXA Subunit A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 卡維地洛β-D-葡萄糖苷酸(mixture of diasteromers)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Carvedilol β-D-Glucuronide (mixture of diasteromers)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT-15 [HCT15](S)-(-)-1-苯乙醇(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(S)-(-)-2-Methyl-1-butanol
人細(xì)胞培養(yǎng)大鼠腎系膜細(xì)胞;RMC塞來昔布羧酸Celecoxib Carboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-HCV-NS2 細(xì)胞，HeLa 229細(xì)胞 EAC-E2G8細(xì)胞，鼠腹水瘤4'-反式-羥基西洛他唑4'-trans-Hydroxy Cilostazol質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人胚胎心肌組織來源細(xì)胞;CCC-HEH-23,4-脫氫西洛他唑3,4-Dehydro Cilostazol質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

POSTN Others Mouse 小鼠 POSTN / OSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 西洛他唑-d11Cilostazol-d11質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

胃粘膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)去二甲基氯化西酞普蘭鹽酸鹽Didemethylchloro Citalopram 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
收到人細(xì)胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。