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資源名稱　正常人皮膚成纖維細(xì)胞
種屬:NHDF

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

生長(zhǎng)條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)

存儲(chǔ)條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
正常人皮膚成纖維細(xì)胞廠家來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。

培養(yǎng)操作步驟：
正常人皮膚成纖維細(xì)胞廠家1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用*化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

以下是公司正在在熱銷的產(chǎn)品：
人胚腎細(xì)胞;293 [HEK-293]Fmoc-L-beta-高谷氨酸6-叔丁酯Fmoc-L-β-Homoglutamic acid 6-tert-butyl ester質(zhì)量規(guī)格：0.98

KNG1 Others Human 人 KNG1 / BDK / Kininogen-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 高精氨酸H-HomoArg-OH質(zhì)量規(guī)格：98%，BR，L型

腦平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)BOC-D-纈氨酸Boc-D-Val-OH質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

FCGR2B Others Human 人 CD32b / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) BOC-L-苯甘氨酸Boc-Phg-OH質(zhì)量規(guī)格：0.98

NRK-49F 大鼠正常腎成纖維細(xì)胞BOC-L-高苯丙氨酸BOC-L-Homophenylalanine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
TFPI Others Mouse 小鼠 TFPI / LACI / EPI 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2,3-二溴丙酰胺(98%)質(zhì)量規(guī)格：0.982,3-Dibromopropionamide

CL-0127JEG-3(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2滑石粉(800目)質(zhì)量規(guī)格：800目Talc

IgG Others Rabbit 兔 IgG-Fc (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 滑石粉(藥用級(jí),325目)質(zhì)量規(guī)格：藥用級(jí),325目Talc

小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL硼砂pH標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(硼砂PH(25℃)：9.18)質(zhì)量規(guī)格：硼砂PH(25℃)：9.18pH standard－Borax

Hepa 1-6小鼠細(xì)胞 Hepa mouse hepatoma cell line 1-6 DMEM+10%FBS(-)-莨菪堿,L-天仙子胺，L-天仙子堿質(zhì)量規(guī)格：>99%(-)-Hyoscyamine
人絨毛間葉成纖維細(xì)胞總RNAHVMF NAGUANIDINExy7noCHLORIDE鹽酸胍技術(shù)級(jí)白色至微黃色顆粒結(jié)晶粉末RTsigma

EREG Others Human 人 Epiregulin / EREG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 氘代炳同-D6 cCqTONq-D6 666-2-4

Eca-109 人細(xì)胞葡聚糖凝膠 Sephade... Sephadex LH-20 Null 25G 分離試劑

CL-0393NCI-H209(人小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2HISTOCHOICETISSUEFIXATIVEWITHOUTALCOHOL組織固定劑組織學(xué)級(jí)微黃無(wú)混濁液體RTsigma

MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞(糖原III)
正常人皮膚成纖維細(xì)胞廠家NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD)碳酸鋇(>99%,BR)Barium carbonate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

MX-1(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腮腺細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)苯甲酰胺(>Benzamide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小氣道平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)比布里希猩紅(>90%,BS)Biebrich scarlet質(zhì)量規(guī)格：>90%,BS

IL9 Others Human 人 IL-9 / Ierleukin-9 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 檸檬酸鈣；檸檬酸鈣四水Calcium , tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)硫酸銫(分子生物學(xué)級(jí))Cesium sulfate質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,分子生物學(xué)級(jí)