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人肺腺癌未經(jīng)放細(xì)胞說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人肺腺癌未經(jīng)放細(xì)胞說明書
種屬:HumanCellline1D356

形態(tài):上皮細(xì)胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS

生長特性:貼壁生長
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人肺腺癌未經(jīng)放細(xì)胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) D-叔亮氨酸鹽酸鹽D-tert-Leucine 質(zhì)量規(guī)格：BR，98.5%

人卵巢;PA-1DTAC；十二烷基三甲基氯化銨Dodecyltrimethylammonium chloride(DTAC)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

貓腎細(xì)胞;F81 EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞，CGM1細(xì)胞 CCC-SMC-2細(xì)胞，兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞CTAC;十六烷基三甲基氯化銨CTAC質(zhì)量規(guī)格：>99%

人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92MI [NK92MI]十八烷基三甲基氯化銨Stearyl Trimethyl Ammoium Chloride(STAC)質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

CD244 Others Human 人 2B4 / SLAMF / CD244 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 十烷基三甲基氯化銨Decyltrimethylammonium chloride質(zhì)量規(guī)格：>99%
WI-38(人胚肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸心得安質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Propranolol

HUASMC-c 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HUASMC) 500,000cells 胃黏膜上皮Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)(R)-(+)-鹽酸心得安質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口(R)-(+)-Propranolol

子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)外消旋心得安β-D-葡萄糖苷酸鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口rac Propranolol β-D-Glucuronide  Salt

IL3 Others Human 人 IL-3 / Ierleukin-3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 外消旋7-羥基心得安質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口rac 7-Hydroxy Propranolol

中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系*);CHO-K1纈絡(luò)肽（VQY），豬質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRValosin Peptide (VQY),porcine
人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17wo7iumFORMATE酸鈉*白色粉末RTsigma

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 燦爛綠;亮綠;減性亮綠;鹽沙綠 Brillicnt grqqn;DicMond grqqn G;qMqrcld grqqn crystcl;Mclcchitq grqqn G;C.I. 42040 633-03-4

CL-0306SMC-1(人胸膜瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2二青 FF Xylene Cyanol FF (for molecular biolog... 2650-17-1 1G 染色劑

A673細(xì)胞，橫紋肌癌細(xì)胞 人巨核細(xì)胞保細(xì)胞,Dami細(xì)胞 人惡性多發(fā)性;ERA-2D--TagatoseD-塔格糖250毫克BR，牡蠣提取

293T(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2L-Mine 25g/100g/250g/Sigma5g 國產(chǎn)
人肺腺癌未經(jīng)放細(xì)胞說明書CD3D Others Cynomolgus 食蟹猴 CD3d / CD3 delta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 酸棗仁皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)Jujuboside D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL偽原薯蕷皂苷Pseduoprotodioscin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

HCC-LM3人細(xì)胞 HCC-LM3 human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS氧化芍藥苷,羥基芍藥苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Oxypaeoniflorin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

LRIG1 Protein Mouse 重組小鼠 LRIG1 / LIG-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)3-異倒捻子素3-isomangostin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

SW1116(人腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)柚皮苷二氫查爾酮Naringin dihydrochalcone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
收到人肺腺癌未經(jīng)放細(xì)胞說明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。