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培養(yǎng)操作步驟：
人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

資源名稱　人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞
種屬:Hacat

類型:貼壁

形態(tài):上皮細(xì)胞樣

分離基物:Hacat細(xì)胞源自一位62歲患有男性的病灶外圍正常皮膚

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

應(yīng)用領(lǐng)域:Hacat細(xì)胞角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽(yáng)性。

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEM＋15% FBS＋1% P/S

生長(zhǎng)條件:氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用*化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
以下是公司正在在熱銷的產(chǎn)品：
HCT116/L 人耐奧沙利鉑耐藥株alpha-熊果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)alpha-Arbutin 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

SEMA4D Others Mouse 小鼠 Semaphorin-4D / SEMA4D / CD100 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-羥基脯氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)L-Hydroxyproline質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株;7WCY1.0L-羥基脯氨酸L-Hydroxyproline質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

SDC1 Others Rat 大鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-正亮氨酸L-Norleucine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人臍帶單核細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLFmoc-D-4-苯丙氨酸Fmoc-4-iodo-D-Phe-OH質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%
黃牛皮膚細(xì)胞;BTA-S2亮抑蛋白酶肽(進(jìn)口)質(zhì)量規(guī)格：≥95%,進(jìn)口半硫酸鹽Leupeptin

KLK13 Others Human 人 KLK13 / Kallikrein-13 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 胃酶抑素A;抑肽素;胃蛋白酶抑制劑質(zhì)量規(guī)格：≥90%,進(jìn)分Pepstatin A microbial

CM-H052人胎盤絨毛膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL膽紅素質(zhì)量規(guī)格：≥85%,BRBilibubin

IL9R Others Rat 大鼠 IL9R / Ierleukin 9 receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 比伐盧定(TFA)質(zhì)量規(guī)格：度大于98%Bivalirudin TFA

小鼠脈絡(luò)膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL比馬素/貝美前列素質(zhì)量規(guī)格：度> 99%Bimatoprost
Promocell C-28051 Monocyte Attachme Medium, 單核細(xì)胞附著培養(yǎng)基(即用型) 250ml薄荷醇（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Menthol

人上皮樣細(xì)胞;BEAS-2B補(bǔ)骨脂定（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Psoralidin

DCBLD2 Others Human 人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 補(bǔ)骨脂二氫黃酮;補(bǔ)骨脂甲素質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Bavachin

CL-0368INS-1(大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2補(bǔ)骨脂酚(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Bakuchiol

EL4IL-2細(xì)胞，瘤細(xì)胞 人急性早幼粒細(xì)胞,NB4細(xì)胞 人晶體上皮細(xì)胞永生系;SRA01/04(HLE)D-(-)-奎寧酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品D-(?)-Quinic acid
人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A托伐普坦 Tolvaptan質(zhì)量規(guī)格：度≥99.0%，BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

GDF15 Others Human 人 GDF-15 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 磺胺噻唑Sulfathiazole質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞MEF磺胺噻唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Sulfathiazole質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

MARK3 Others Human 人 MARK3 / CTAK1 / EMK-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 環(huán)苯扎林鹽酸鹽Cyclobenzaprine HCl質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人胚肝二倍體細(xì)胞;CCC-HEL-1鹽酸美托咪定Medetomidine HCl質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。