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小鼠胰島素瘤胰島a細胞 冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠胰島素瘤胰島a細胞
種屬:alpha TC1 clone 6

類型:alpha cells

形態(tài):epithelial

提供形式:T25細胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級:2

模式菌株:未知

應用領域:The alpha TC1 clone 6 cells are useful for studying many aspects of islet biology, including glucagon biosynthesis and cytokine sensitivity.

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

傳代方法:Volumes used in this protocol are for 75 cm2 flasks; proportionally reduce or increase amount of dissociation medium for culture vessels of other sizes. NOTE: Warm all solutions to 37.0°C prior to use Transfer all medium and floating cells from flask to a 50 mL centrifuge tube. Adherent cells are removed using Cell Dissociation Buffer (an enzyme free buffer; Invitrogen, Catalog No. 13150-016) diluted 1:5 with Hanks' Balanced Salt Solution. Add 5.0 mL of diluted cell dissociation buffer per 75 cm2 flask and gently rock flask to bathe the cells at room temperature for 1 to 2 minutes. Allow the flask to remain at room temperature for 1 to 5 additional minutes until cells have detached from the flask. Firmly tap the flask against palm of hand to dislodge cells. Add 10.0 mL of fresh medium per 75 cm2 flask and triturate up and down directing the stream along the growth surface of the flask to dislodge the cells and break up some of the clumps. Transfer these cells to the centrifuge tube from Step 1. Centrifuge at 125 x g  for 5 to 10 minutes. Remove medium and resuspend pellet in fresh complete medium. Add appropriate aliquots of cell suspension to new culture vessels. Incubate cultures at 37°C. Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:4 is recommended. Medium renewal: Every 2 to 3 days.

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長特性:adherent, with loosely attached clusters and some single cells in suspension

存儲條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是小鼠胰島素瘤胰島a細胞 的相關熱銷產(chǎn)品：
人APP-PS1雙基因轉染CHO細胞株;7WPS1雙去氧基姜黃素(標準品)Bisdemethoxycurcumin質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

TNFRSF9 Others Mouse 小鼠 4-1BB / TNFRSF9 / CD137 人細胞裂解液 (陽性對照) L-山梨糖(標準品)L-(-)-Sorbose質量規(guī)格：分析標準品

KP-N-NS 人腎上腺神經(jīng)母細胞瘤()糖精鈉 水合物(標準品)Saccharin  salt hydrate質量規(guī)格：分析標準品

SiHa人子宮頸鱗癌細胞 SiHa human uterine cervical squamous cell carcinoma MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS標準溶液(0.05000mol/L(0.1N))Iodine solution質量規(guī)格：0.05000mol/L(0.1N)

SHH Protein Mouse 重組小鼠 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (His 標簽)標準溶液(1000μg/ml,溶劑：水)Iodine solution質量規(guī)格：1000μg/ml,溶劑：水
家貓皮膚細胞;FCA-S1 胚，HFL-I細胞 IEC-6細胞，大鼠小腸隱窩上皮細胞檸檬酸三丙酯(>97.0%(T))質量規(guī)格：>97.0%(T)Tripropyl

人正常肺上皮細胞;BEAS-2BN-丁基苯磺酰胺(>98.0%(HPLC)(N))質量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)N-Butylbenzenesulfonamide

CD200R1L Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200RLa 人細胞裂解液 (陽性對照) D-(+)-樟腦(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)(+)-Camphor

原代成纖維細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml阿卡波糖十三醋酸酯質量規(guī)格：美國進口Acarbose Tridecaacetate

CD38 Others Rabbit 兔 SCARB3 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬苦素，黃柏內(nèi)酯(橙皮提取) 質量規(guī)格：HPLC≥98%,橙皮提取Limonin
TF-1(人血液細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠細胞;BC3H1CHAPSO3-[(3-膽胺基)二甲基基]-2-羥基-1-磺酸內(nèi)鹽25克ACS

人間充質干細胞-*裂解物HMSC-hp L沒食子酸一水物 Gallic acid,≥98.0% 99-24-1 25G 通用試劑

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 肝速內(nèi);肝速;肝鱗脂 Hqpcrin wo7ium sclt;Hqpscl;Lipohqpin;LiquqMin;Lipohqpinqttq;Longhqpcrin;Monopcrin;Pcnhqprin;Pulcrin 9041-8-1

正常小鼠Leydig細胞;TM3選擇性巧克力平板1米

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL13494-80-9碲塊Tellurium
小鼠胰島素瘤胰島a細胞 小鼠皮質神經(jīng)元MN-c桑皮苷A（標準品）Mulberroside A質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

MSLN Others Human 人 MSLN / Mesothelin 人細胞裂解液 (陽性對照) 桑色素(標準品)Morin質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

大鼠*上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL沙苑子苷A（標準品）Complanatoside A質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

BALL-1人B細胞急性細胞 BALL-1 B acute lymphoblastic leukemia cells 90%RPMI1640(內(nèi)含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清山梔苷甲酯（標準品）Shanzhiside methylester質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

EGF Protein Canine 重組狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 (His 標簽)商陸皂苷甲(標準品)Esculentoside A質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
收到小鼠胰島素瘤胰島a細胞 處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。