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細(xì)胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞 冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞
種屬:PT67

提供形式:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

生長特性:貼壁生長

存儲條件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮

細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞凍存步驟：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

收到小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞 處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。
以下是小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞 的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人表皮色素細(xì)胞-深色素RNAHEM-d miRNA5 μg曲唑酮鹽酸鹽-d6Trazodone-d6 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

小鼠腦膜細(xì)胞(MMC)(5×105)N-去甲基米非司酮N-Demethyl Mifepristone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

綿羊肺細(xì)胞;OAR-L1米氮平-d3Mirtazapine-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

小鼠Lewis瘤株;LLT 小鼠前脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL米氮平N-氧化物Mirtazapine N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系 Mouse10-氧米氮平(米氮平雜質(zhì)F)10-Oxo Mirtazapine (Mirtazapine Impurity F)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
人成纖維母細(xì)胞-胎兒(HDF-f)( 5×105 )達(dá)格列嗪;達(dá)格列凈Dapagliflozin質(zhì)量規(guī)格：>97%，BR，生化試劑級

RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元甘草查而酮 A(標(biāo)準(zhǔn)品)Licochalcone A質(zhì)量規(guī)格：含量≥98.0%，標(biāo)準(zhǔn)品

人T瘤細(xì)胞Jurkat亞系;Jurkat77 大鼠腎成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL三氯卡班Triclocarban 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%

P815 小鼠肥大細(xì)胞癌細(xì)胞氯法齊明（標(biāo)準(zhǔn)品）Clofazimine質(zhì)量規(guī)格：供TCL鑒別用

CDNF Others Mouse 小鼠 CDNF / ARMETL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢呋辛酯Cefuroxime axetil質(zhì)量規(guī)格：745~875μg/mg,USP
EFNA3 Others Human 人 EphrinA3 / EFNA3 / EFL2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 瓊脂糖凝膠4B蛋白A，英文名或英文縮寫：Protein A-Sepharose 4B, Fast Flow from Staphylococcus aureus，級別：BR，97%，腐蝕品，規(guī)格：100克

牛胚氣管細(xì)胞;EB (NBL-4)鄰聯(lián)本安言醋鹽 3,3'-Dimqthylbqnzidinq dixy7nochloridq 1961/8/8

FGFBP3 Others Human 人 FGFBP3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) TRISBUFFEREDSALINE(TBS)TAETSTBS片超級白色圓片RTsigma

CL-0169NCI-N87(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×25-胞嘧啶核苷三嶙酸二鈉鹽，英文名或英文縮寫：5′-CTP，2Na，級別：BR，90%，規(guī)格：5克

Caco-2，人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 腺癌阿霉素耐藥株，MEF-7/Adr細(xì)胞 SiHa(子細(xì)胞)7783-20-2銨AMMoniuMsulphate
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞 小鼠*癌細(xì)胞(B類);Pan02神經(jīng)激肽A（4-10）Neurokinin A (4-10)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

CEACAM1 Others Rat 大鼠 CEACAM1 / CD66a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 神經(jīng)肽W-30，人Neuropeptide W-30 (human)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)神經(jīng)肽W-30，大鼠Neuropeptide W-30 (rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

VE細(xì)胞，人內(nèi)皮細(xì)胞 小鼠細(xì)胞,NS-1細(xì)胞 人臍內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHUVEC cDNA神經(jīng)降壓素（1-8）Neurotensin (1-8)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

Psi2 DAP(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2神經(jīng)肽Y（13-36），豬Neuropeptide Y (13-36)(porcine)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR