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小鼠胚胎成纖維細胞說明書冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠胚胎成纖維細胞說明書
種屬:MEF (CF-1) IRR

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:The base medium for this cell line is ATCC-formulated Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Catalog No. 30-2002. To make the complete growth medium, add the following components to the base medium: •fetal bovine serum to a final concentration of 15%
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是小鼠胚胎成纖維細胞說明書的相關熱銷產(chǎn)品：
人角膜成纖維細胞 (HcorF)( 5×105 ) EPC, 大鼠內皮祖細胞 Rattus銀杏內酯B(標準品)Ginkgolide B質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人低分化;SK-LU-1VLup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[β-D-glucopyranosyl(1→4)[a-L-rhamnopyranosyl) (1→2)-a -L-arabinopyranosyl]oxy], (3β,4a)-)質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CANX Others Human 人 CANX / Calnexin 人細胞裂解液 (陽性對照) VHederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人粘膜上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLGDC0994GDC-0994質量規(guī)格：ERK1/2 抑制劑

RAW 264.7細胞，小鼠單核巨噬細胞細胞 溶組織梭菌Closidium histolyticum 水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S3氨三乙酸Nitrilotriacetic acid質量規(guī)格：AR
人內皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL復壁碳納米管 40-60nm(直徑),5-15μm(長度)質量規(guī)格：>97%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 40-60nm(diam.), 5-15μm(length)

D341Med細胞，人髓母細胞瘤細胞 藤黃微球菌/騰黃八疊球菌 貓腎細胞;CRFK復壁碳納米管 40-60nm(直徑),1-2μm(長度)質量規(guī)格：>95%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 40-60nm(diam.), 1-2μm(length)

CCL3 Protein Mouse 重組小鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白復壁碳納米管 60-100nm(直徑),5-15μm(長度)質量規(guī)格：>95%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 60-100nm(diam.), 5-15μm(length)

NIH/3T3(小鼠胚胎細胞) 5×106cells/瓶×2 人 EVI2A 人細胞裂解液 (陽性對照) 3,5-二芐氧基芐溴(>98.0%(GC)(T))質量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)3,5-Dibenzyloxybenzyl Bromide

小鼠色素瘤瘤株;B16復壁碳納米管 10-20nm(直徑),5-15μm(長度)質量規(guī)格：>97%(TPO Method)Carbon Nanotube Multi-walled 10-20nm(diam.), 5-15μm(length)
MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元Cupricsubcaonate鹽基性碳酸銅5克CP，99%

表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KB 人輸尿管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL2-炔基 2-qTHYNYLPYRIDINq 1942-84-

人腸平滑肌細胞RNAHISMC miRNA5 μgChromicacidfoginhibitor霧抑制劑500毫克AR

三.小鼠正常細胞L-TYROSINEL-酪酸美國藥典級25G60-18-4RT

小鼠髖動脈內皮細胞;PIEC3687-31-8LEAD(II) ARSENATE
小鼠胚胎成纖維細胞說明書ANGPT2 Others Human 人 ANG2 / Angiopoietin-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 溴鄰苯三酚紅Bromopyrogallol red質量規(guī)格：IND

星形膠質細胞培養(yǎng)基ACM鹽酸副品紅Basic Fuchsin質量規(guī)格：BS,用于生物學染色

CD164 Others Human 人 CD164 / Endolyn 人細胞裂解液 (陽性對照) 燦爛黃Brilliant Yellow質量規(guī)格：IND

GPS5 豚鼠皮膚成纖維樣細胞剛果紅(AR)Congo red質量規(guī)格：AR

CM-R123大鼠角膜成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL鈣羧酸指示劑(AR)Calconcarboxylic acid質量規(guī)格：AR
收到小鼠胚胎成纖維細胞說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。