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細胞培養(yǎng)過程：

冷凍保存細胞之方法：
人細胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

資源名稱　人細胞培養(yǎng)
種屬:GIST-48

類型:貼壁生長

形態(tài):形態(tài)上表現(xiàn)為梭形或/和上皮樣細胞@2017

分離基物:人，

提供形式:T25培養(yǎng)瓶細胞/凍存管

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%McCoy’s 5A+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳37攝氏度

存儲條件:90%FBS+10%DMSO 液氮

細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞凍存步驟：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到人細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
以下是人細胞培養(yǎng)的相關熱銷產(chǎn)品：
C57BL/6小鼠骨髓間質(zhì)干細胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cellsAc-YVAD-肽核酸Ac-YVAD-pNA質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

HME6細胞，人色素瘤細胞 動物雙歧桿菌 EB病毒轉化的人B細胞;KMY0919β-丙內(nèi)酯(>95.0%(GC)(T))β-Propiolactone質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)(T)

UMR-106(大鼠細胞) 5×106cells/瓶×2DL-丙交酯(>98.0%(T))DL-Lactide質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

Hut-102(人皮膚T瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐藥細胞株 EB病毒轉化的人B細胞;KMY1022L-(-)-交酯(>98.0%(T))L-(-)-Lactide質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細胞;NK-92 [NK92]δ-戊內(nèi)酯(>98.0%(GC))δ-Valerolactone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)
人平滑肌細胞總RNAHBVSMC tDNA牛血紅蛋白質(zhì)量規(guī)格：BRHemoglobin

山羊皮膚成纖維樣細胞;DG-S1 胚腎細胞，AAV-293細胞 HP615細胞，615小鼠瘤株聚乙二醇10000質(zhì)量規(guī)格：分子量9,000~11,000PEG 10000

人干細胞因子單*抗體細胞株;AMS2(SCF3)DL-蘋果酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRDL-Malic acid

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Common magpie/Hong Kong/2256/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) D-酪氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRD-Tyrosine

CL-0301M-NFS-60 (小鼠細胞G-CSF依賴性)5×106cells/瓶×2D-組氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRD-Histidine
615小鼠網(wǎng)織細胞性瘤株;L615 小鼠腎足突細胞完全培養(yǎng)基 100mL10-脫乙酰巴卡亭質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR10-Deacetylbaccatin III

人絨毛膜內(nèi)皮細胞 Human維生素B1(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標準品vitamin B1

EFNA2 Others Mouse 小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 人細胞裂解液 (陽性對照) 維生素B1質(zhì)量規(guī)格：>99%,USPVitamin B1

人無色素睫狀上皮細胞HNPCEpiC維生素B12(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標準品vitamin B12

NOV Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured)10-十一炔-1-醇(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)10-Undecyn-1-ol
人細胞培養(yǎng)人成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL煙酸乙酯(>Ethyl nicotinate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

HS-4細胞，人細胞系 鼠傷寒沙門氏菌Ta97 雜交瘤(B類);Z172A4C4C6F3G12二茂鐵Ferrocene質(zhì)量規(guī)格：>98%

XCL1 Protein Canine 重組狗 XCL1 蛋白 (His 標簽)反苯環(huán)丙胺鹽酸鹽；單胺氧化酶(MAO)抑制劑Tranylcypromine (2-PCPA) HCl質(zhì)量規(guī)格：>97%,單胺氧化酶(MAO)抑制劑

ME-180(人子宮頸表皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細胞裂解液 (陽性對照) 黃胺酸(>96.5%，BS)Flavianic acid hydrate質(zhì)量規(guī)格：>96.5%，BS

敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21酸性品紅鈣(>60%，BS)Fuchsin acid calcium salt質(zhì)量規(guī)格：>60%，BS