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人細胞（2013年新引進）（干細胞庫保藏）說明書冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人細胞（2013年新引進）（干細胞庫保藏）說明書
種屬:NCI-N87

類型:胃

形態(tài):上皮樣

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:1. 人細胞NCI-N87完全培養(yǎng)液配方（100 ml）： 　　 RPMI 1640 Medium (Invitrogen, 11875-093) 88 ml 　　 FBS (Gibco) 10 ml Glutamax（invitrogen 35050）

傳代方法:（注：該細胞貼壁較慢，建議復(fù)蘇后讓細胞貼壁48h后再進行后續(xù)實驗操作。）

生長條件:氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度

生長特性:貼壁生長
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人細胞（2013年新引進）（干細胞庫保藏）說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
STO(小鼠胚成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL18RAP / IL1R7 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 變色酸鈉,鉻變酸二鈉Chromotropic acid di salt dihydrate質(zhì)量規(guī)格：AR

人虹膜色素上皮細胞HIPEpiC溴百里酚藍鈉鹽Bromothymol blue  salt質(zhì)量規(guī)格：AR

EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細胞裂解液 (陽性對照) 特地唑胺游離堿Tedizolid free base質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL特地唑胺;特地唑胺1酸酯Tedizolid phosphate;TR-701FA質(zhì)量規(guī)格：>99%;BR

CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性細胞T細胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 滅活血清3-甲基-2-苯并噻唑酮腙鹽酸鹽，水合MBTH  hydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
小鼠角膜成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL氘代苯-D6(0.5ml x 10 )質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%Benzene-D6

OPM-2-CMV-EGFP(穩(wěn)定株)人細胞 OPM-2-CMV-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱滅活)氘代苯-D6(0.55ml x 10)質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%+0.03%TMSBenzene-D6

IL21R Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 蛋白 (His 標簽)氘代苯-D6(10g )質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%Benzene-D6

人脊髓星形膠質(zhì)細胞(HA-sp)(1×106) 人腦微內(nèi)皮細胞 Human氘代苯-D6(10g )質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%+0.03%TMSBenzene-D6

CM-H057人卵巢微內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL氘代苯-D6(25g)質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%Benzene-D6
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E7 小鼠皮下脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mLD-醇（標準品）質(zhì)量規(guī)格：95%，標準品D-Pinitol

HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞 Human果菊苷（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Echinacoside

MEP1A Others Human 人 MEP1A / PPHA 人細胞裂解液 (陽性對照) 蘿酸(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Usnic acid

人主動脈內(nèi)皮細胞裂解物HAECL酸棗仁皂苷A(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Jujuboside A

TNFSF13B Others Cynomolgus 食蟹猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 人細胞裂解液 (陽性對照) D-焦谷氨酸（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查D-Pyroglutamic acid
人細胞（2013年新引進）（干細胞庫保藏）說明書HFDPC-c 人類的毛細胞(HFDPC) 500,000cells 膀胱平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)銥標準溶液(1000μg/ml,基質(zhì)：2.0mol/L鹽酸)Iridium standard solution質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基質(zhì)：2.0mol/L鹽酸

平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鎳標準溶液(500mg/L,溶劑：1%硝酸)Nickel standard質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：1%硝酸

IFNA8 Others Human 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽性對照) 鉀標準溶液(100μg/mL,基體:1%HCl)Potassium standard質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL,基體:1%HCl

中國倉鼠卵巢細胞(亞系*);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA鐠標準溶液(1000μg/mL,基體：10%HCl)Praseodymium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mL,基體：10%HCl

中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr- 喉表皮樣癌細胞，HEp-2細胞 SF-9細胞，昆蟲細胞系鎢標準溶液(1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOH)Tungsten solution質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOH
收到人細胞（2013年新引進）（干細胞庫保藏）說明書處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。