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人B細胞細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人B細胞細胞培養(yǎng)
種屬:DOHH2

類型:懸浮生長

形態(tài):淋巴母細胞，圓形

分離基物:人彌漫大B；男性

提供形式:T25細胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級:2

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%高糖DMEM（含4mM L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉）+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲條件:90%FBS+10%DMSO 液氮
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人B細胞細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源) Rattus地奧司明Diosimin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥90%,BR

EFNA4 Others Mouse 小鼠 EFNA4 / Ephrin-A4 人細胞裂解液 (陽性對照) 地膚子皂苷Ic（標準品）Momordin Ic質(zhì)量規(guī)格：僅供鑒別用

人內(nèi)皮細胞HLEC地榆皂苷I（標準品）Ziyuglycoside I質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CDH17 Others Rat 大鼠 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 人細胞裂解液 (陽性對照) 地榆皂苷II（標準品）Ziyuglycoside II質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

大鼠肝竇內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL丁香酚（標準品）Eugenol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標準品
中國倉鼠卵巢細胞;TPO-CHO-I長春新堿（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Vincristine

CGB7 Others Human 人 CGB7 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸金雀花堿；硫酸司巴?。藴势罚┵|(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Sparteine sulfate

CL-0073DH82(犬巨噬細胞)5×106cells/瓶×2高烏甲素（標準品）質(zhì)量規(guī)格：滴定法≥98%，標準品Lappaconitine

QGY-7701, 人細胞 細胞,Hep3B細胞 Hs 578T(癌細胞)番茄紅素（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥90%,標準品,充氮氣保護Lycopene

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞;MC3T3-E1脫氫諾龍醋酸酯質(zhì)量規(guī)格：>96%Dehydronandrolon
人主動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL糖、醇發(fā)酵培養(yǎng)基基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：RT500克

RM-1細胞，小鼠細胞 LoVo(細胞) 人結(jié)直腸腺癌細胞;HCT 116 [HCT116]鄰-β-D-... 2-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside 2816-24-2 100MG 通用試劑

CCL1 Protein Human 重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 (Fc 標簽)香精 Jcsminq flcvour

SW480(人細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 肝素shēng huà shì jì容量：2～8℃25毫克

人尿道上皮細胞cDNAHUC cDNA崩潰酶(-20℃)NA
人B細胞細胞培養(yǎng)A-375 [A375], 人惡性素瘤細胞株植物血凝素Phytohemagglutinin質(zhì)量規(guī)格：BR

人橫紋肌細胞;A-204 大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL6-糠基氨基嘌呤,激動素Kinetin,6-Furfurylaminopurine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

主動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)乙二醇雙(2-氨基乙基)四乙酸EGTA, egtazic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學級

ENPEP Others Human 人 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 無水1酸二氫鈉(分子生物學級) phosphate, monobasic, anhydrous質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,分子生物學級

中國倉鼠卵巢細胞(亞系*); EPO-CHO-T月桂?；“彼徕c(分子生物學級) lauroyl sarcosine質(zhì)量規(guī)格：>95%,分子生物學級
收到人B細胞細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。