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冷凍保存細胞之方法：
人上皮細胞培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人上皮細胞培養(yǎng)
種屬:16HBE

類型:貼壁生長

形態(tài):上皮樣細胞

分離基物:人，肺

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%FBS

生長條件:95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

存儲條件:50%RPMI-1640+40%FBS+10%DMSO 液氮
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人上皮細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
倉鼠腎細胞;HL-1地拉羅司,去鐵斯若Deferasirox質(zhì)量規(guī)格：>99.0%

小鼠樹突狀細胞低轉(zhuǎn)移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP 小鼠內(nèi)臟脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mL地拉羅司(標準品)Deferasirox質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

HET-1A, 人食管上皮細胞 Human利培酮Risperidone質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

CD209B Others Mouse 小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 利培酮（標準品）Risperidone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品

人顱骨造骨細胞裂解物HCOL利托那韋(標準品)Ritonavir質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品
中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr- 喉表皮樣癌細胞，HEp-2細胞 SF-9細胞，昆蟲細胞系胰素樣肽-2（1-34)，人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRGLP-2 (1-34) (human)

人胚;CCC-HPF-1胰素（1-29），牛，人，豬質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRGlucagon (1 - 29), bovine,human, porcine

HA Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Wisconsin/67/X-161/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 胰素（19-29），牛，人，豬質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRGlucagon (19 - 29), bovine,human, porcine

成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)胰素樣肽Ⅰ（7-36）酰胺，人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRGlucagon-Like Peptide I (7-36),amide, human

ASGR2 Others Human 人 ASGR2 人細胞裂解液 (陽性對照) 升麻素（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Cimifugin
人胚肺二倍體細胞;KMB-17 人甲狀腺濾泡上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL聚酰胺shēng huà shì jì容量：10毫升

人卵巢腺癌細胞;SK-OV-32,4,5-三錄本酚 2,4,5-Trichlorophqnol 92-92-4

APCS Others Human 人 Serum amyloid P compone / APCS / SAP 人細胞裂解液 (陽性對照) 微量可調(diào)移液器P10shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1克

兔脂肪間質(zhì)干細胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells虎紅鈉鹽shēng huà shì jì容量：100克

BE(2)-M17細胞，人神經(jīng)母細胞瘤細胞 寄生曲霉 293來源病毒包裝細胞;ΦA117-78-22-羧基醌ANTHRAinoneONE-2-CARBOXYLIC ACID
人上皮細胞培養(yǎng)KP-N-NS人腎上腺神經(jīng)母細胞瘤細胞() KP-N-NS human adrenal neuroblastoma cells (brain metastasis) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS重水,氧化氘(50G)Deuterium Oxide質(zhì)量規(guī)格：D,99.9%

SF763細胞，人細胞 克雷伯菌 人顱骨造骨細胞總RNAHCO NA重水,氧化氘(100G)Deuterium Oxide質(zhì)量規(guī)格：D,99.9%

RKO-AS45-1(人轉(zhuǎn)基因細胞) 5×106cells/瓶×2氘代硫酸(0.55 ml x 10)Sulfuric Acid-D2質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%, acidity 90% IN D2O

FRhK-4(恒河猴胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0307SW1116(人腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 大耳山羊腎細胞;LDG-2氘代硫酸(50g )Sulfuric Acid-D2質(zhì)量規(guī)格：D, 99%, acidity 96-98% IN D2O

主動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)氘代硫酸(100g )Sulfuric Acid-D2質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%, acidity 90% IN D2O
收到人上皮細胞培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。