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冷凍保存細(xì)胞之方法：
人卵巢顆粒細(xì)胞說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人卵巢顆粒細(xì)胞說明書
種屬:COV434

類型:貼壁生長

形態(tài):CM2-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣， 多數(shù)細(xì)長型，少部分多角形，排列緊密

分離基物:人，卵巢顆粒細(xì)胞癌；女性

提供形式:凍存管/T25培養(yǎng)瓶

安全等級:1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約3min取出。傳代用12mL CM2-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

生長條件:37℃，5%CO2，CM2-1培養(yǎng)液。CM2-1培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培養(yǎng)基，含谷氨酰胺。

存儲條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜移至液氮中保存。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人卵巢顆粒細(xì)胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人前脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL海醇Iohexol質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

MC細(xì)胞，大鼠巨噬細(xì)胞 THP-1(人單核細(xì)胞) 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-HCV-NS4A麥芽1酸化酶, 硫酸銨懸浮液Maltose Phosphorylase 5U/mg質(zhì)量規(guī)格：BC Grade

EFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標(biāo)簽)嗪草酮(>95%,植物激素級)Metribuzin質(zhì)量規(guī)格：>95%,植物激素級

BC-019(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠瘤細(xì)胞;P388D1(IL-1)4-甲基傘形酮酰-alpha-D-吡喃糖苷MU-alpha-GAL質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級

人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-3粘酸(>98%，BC)Mucic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC
豬腎細(xì)胞;PK(15)5-TAMRA；5-羧基四甲基羅丹明琥珀脂質(zhì)量規(guī)格：>90%5-TAMRA, SE

PIGR Others Human 人 PIGR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 吉拉爾特試劑T質(zhì)量規(guī)格：0.98Girard’s reagent T

CM-M047小鼠腸微細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL硫酸長春新堿/硫酸醛基長春堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Vincristine Sulfate

TACSTD2 Others Mouse 小鼠 OP2 / TACSTD2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 帕唑帕尼質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRPazopanib

小鼠腎小管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL非洛地平/非氯地平質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP30,BRFelodipine
ALCAM Others Mouse 小鼠 ALCAM / CD166 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 阿托伐他汀甲酯質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Atorvastatin Methyl Ester

腎小管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)氮卓斯汀-13C,d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Azelastine-13C,d3

IL18RAP Others Mouse 小鼠 IL18RAP / IL1R7 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-去甲氮卓斯汀質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口N-Desmethyl Azelastine

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-C4(S)-鹽酸氮卓斯汀質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口(S)-Azelastine

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO 1beta9,12.5 Clone 36 細(xì)胞，C127細(xì)胞 J774A.1細(xì)胞，鼠腹水單核細(xì)胞瘤阿替洛爾-d7質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Atenolol-d7
人卵巢顆粒細(xì)胞說明書豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1紫檀芪（標(biāo)準(zhǔn)品）Pterostilbene質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

LTEP-a-2細(xì)胞，人 猴腎細(xì)胞系,VERO E6細(xì)胞 CM-M050小鼠卵巢顆粒細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL紫檀芪,紫檀Pterostilbene質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

SHG-44 (人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2魚藤酮Rotenone質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR

NHEK.f-c pooled 正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(NHEK)少年，混合 500,000cells 原代上皮細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml7-表紫杉醇（標(biāo)準(zhǔn)品）7-Epitaxol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

子宮成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)澳洲茄胺;澳州茄胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Solasodine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
收到人卵巢顆粒細(xì)胞說明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。