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冷凍保存細(xì)胞之方法？
大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞 RatSkin:NormalEpidermalKeratinocytes冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
本公司提供的細(xì)胞都是現(xiàn)貨供應(yīng)，詳細(xì)大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞 RatSkin:NormalEpidermalKeratinocytes說(shuō)明書(shū)！

大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞 RatSkin:NormalEpidermalKeratinocytes

     產(chǎn)品描述：大鼠細(xì)胞主要分布于表皮基底層，在上皮程序性死亡后，細(xì)胞產(chǎn)生角化并移向表皮。體外培養(yǎng)的細(xì)胞容易導(dǎo)致終末分化，不能充分增殖。表皮覆蓋皮膚和粘膜表面，作為機(jī)體抵抗外界刺激的第一道防御性屏障，具有其他器官不可替代的重要生理功能。角質(zhì)形成細(xì)胞可產(chǎn)生粘附分子和細(xì)胞因子，與天然免疫和體內(nèi)穩(wěn)態(tài)相關(guān)。公司提供的大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞，采用胰蛋白酶法制備而來(lái)。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專(zhuān)利產(chǎn)品大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(RatSkinPrimaCell:NormalEpidermalKeratinocytesCatNo.3-7547)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞傳5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和。
      發(fā)貨：客戶(hù)可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度?？萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿(mǎn)50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書(shū)及注意事項(xiàng)；3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
      保存和應(yīng)用：客戶(hù)可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶(hù)收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于。

【培養(yǎng)指南】
大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞 RatSkin:NormalEpidermalKeratinocytes對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
【細(xì)胞凍存】
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行產(chǎn)品名稱(chēng)凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

T-CEM細(xì)胞，人T細(xì)胞細(xì)胞 615小鼠瘤株,HP615細(xì)胞 MesenFectagen? 間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒溴化亞銅(>98%,BR)Copper(I) bromide質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2無(wú)水乙酸銅(>99%,BR)Copper(II) acetate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

Ca Ski(人上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0014A-375(人惡性細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠血細(xì)胞;WEHI-3 [WEHI3]溴化銅(>99%,BR)Copper(II) bromide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

新生牛眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞;NBTF檸檬酸銅(>98.5%,BR)Copper(II) citrate, hydrate質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

10. 尿道細(xì)胞系統(tǒng)氫氧化銅(>96.5%,Tech Grade)Copper(II) hydroxide質(zhì)量規(guī)格：>96.5%,工業(yè)級(jí)

人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞cDNAHN-h cDNA吡羅昔康-d3Piroxicam-d3質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

PRKAR1A Others Human 人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 泊沙康唑-d4Posaconazole-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

T739小鼠肺腺株;LA795利福昔明標(biāo)記d6Rifaximin - Labeled d6質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

HCCC-9810細(xì)胞，人亞力山大細(xì)胞 人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,7WCY1.0細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2羅匹尼羅N-氧化物Ropinirole N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

Lec1(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23-氧羅匹尼羅鹽酸鹽3-Oxo Ropinirole Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

ICAM3 Others Human 人 CD50 / ICAM3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DON毒素，毒素；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(>98%(HPLC),BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%(HPLC),BRDeoxynivalenol

CM-R013大鼠肺大內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL第威德合金質(zhì)量規(guī)格：工業(yè)級(jí)Devarda's alloy

UNC5B Others Rat 大鼠 UNC5B / UNC5H2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 噻奈普汀鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRTianeptine sodium salt

人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞HRECD-谷氨酰胺質(zhì)量規(guī)格：0.98D-Glutamine

7F2細(xì)胞，小鼠雜交瘤細(xì)胞 人細(xì)胞,QBC939細(xì)胞 大鼠海馬神經(jīng)元RN-h扎托布洛芬質(zhì)量規(guī)格：>98%Zaltoprofen

大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞 RatSkin:NormalEpidermalKeratinocytesCL-0418QGY-7703(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2N7-(2-氨基甲酰-2-羥乙基)鳥(niǎo)嘌呤質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口N7-(2-Carbamoyl-2-hydroxyethyl)guanine

小鼠成纖維細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)2-氨基-6,8-二羥基嘌呤鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口2-Amino-6,8-dihydroxypurine Hydrochloride

人男性正常細(xì)胞;Hs68 人粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL全反式甲酯視黃酸質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口all-trans Retinoic Acid Methyl Ester

人真皮成纖維細(xì)胞-裂解物HDF-a L13-順式-甲酯視黃酸質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口13-cis Retinoic Acid Methyl Ester

SELE Others Rat 大鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 6-FAM ；6-羧基熒光素質(zhì)量規(guī)格：0.956-Carboxyfluorescein

【復(fù)蘇的原則】
快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫(kù)全國(guó)各地均可發(fā)貨，全國(guó)統(tǒng)一價(jià)格，本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。