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大鼠緊張素1-7（ANG 1-7）elisa檢測試劑盒說明書  Rat Angiotensin 1-7/ANG 1-7 ELISA Kit
【實驗用途】Ang-（1-7）是由天門冬氨酸-精氨酸-纈氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-組氨酸和脯氨酸（Asp-Arg-Val- Tyr-Ile-His-Pro）組成的7肽。Ang-（1-7）通過兩種途徑合成，一種是由中性肽鏈內(nèi)切酶（NEP）或脯氨?；逆渻?nèi)切酶（PEP）水解10肽的AngⅠ（1-10）第7位脯氨酸和第8位苯丙氨酸之間的肽鏈生成；另一條是由脯氨酰基肽鏈內(nèi)切酶（PEP）或脯氨酰羧肽酶（PCP）水解8肽的AngⅡ羧基端的苯丙氨酸生成。前者是Ang-（1-7）生成的主要途徑，但后者在生成Ang-（1-7）的過程中失活了AngⅡ，因而此代謝途徑的研究也具有重要意義。緊張素-(1-7)具有舒張,,抑制細(xì)胞增殖,、利鈉等生物效應(yīng),且與緩激肽相互作用密切相關(guān)。所提供的elisa檢測試劑盒是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定elisa檢測試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
試劑準(zhǔn)備：
1. 大鼠緊張素1-7（ANG 1-7）elisa檢測試劑盒說明書使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

試劑配制：
1、大鼠緊張素1-7（ANG 1-7）elisa檢測試劑盒說明書酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事項：
1. 大鼠緊張素1-7（ANG 1-7）elisa檢測試劑盒說明書試劑盒使用前請保存在2-8℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品若未用完，請廢棄。
2. 微量試劑運輸中顛簸和可能的倒置，會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象，微加熱至40℃使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。
（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應(yīng)為室溫。
4. 不同批號的試劑盒組份避免混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。
5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，zui好使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)孵育前手工輕輕混勻。
6. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
7. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗結(jié)果。
8. 試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo)本時，請按國家生物試驗室安全防護(hù)條列執(zhí)行。
啶酮酸紙片(30ug/片)于空腸彎曲菌藥敏試驗。

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