兔牙周膜成纖維細胞接受后的處理:
1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4)如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
在確認細胞生長狀態(tài)良好且無污染后,接下來是細胞傳代的關鍵步驟。首先,準備必要的實驗器材,包括無菌的吸管、離心管、培養(yǎng)皿以及適量的PBS緩沖液和胰蛋白酶。確保所有器材都已消毒并置于無菌操作臺中。
6)進行細胞傳代時,輕輕吸去T25瓶中的舊培養(yǎng)基,注意避免吸到細胞層。隨后,加入適量預熱的PBS緩沖液輕輕洗滌細胞表面,以去除殘留的血清和死細胞,洗滌兩次后棄去PBS。
7)緊接著,加入適量的胰蛋白酶(具體量根據(jù)細胞種類和密度調(diào)整),輕輕搖晃使胰酶均勻覆蓋細胞層,隨后將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中消化約2-5分鐘,期間可輕輕拍打培養(yǎng)瓶壁幫助細胞脫落。待細胞變圓、間隙增大時,立即加入含血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
8)使用吸管輕輕吹打細胞懸液,確保細胞完全分散成單個狀態(tài)。隨后,將細胞懸液轉移至離心管中,以適宜的轉速(通常為1000-1500rpm)離心5分鐘,以去除胰酶和細胞碎片。
9)離心結束后,棄去上清液,加入適量的完全培養(yǎng)基重懸細胞。根據(jù)實驗需要,可將細胞按一定比例(如1:2或1:3)接種到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,并輕輕搖晃使細胞均勻分布。最后,將培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶置于37℃、含5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
通過以上步驟,可以確保兔牙周膜成纖維細胞在傳代過程中保持活力并避免污染,為后續(xù)的實驗研究提供高質(zhì)量的細胞樣本。