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漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒實驗步驟

發(fā)表時間:2021-05-26
漏斗狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒實驗步驟
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

實驗通用規(guī)則:
1、洗液不夠時,可用蒸水自行配制PH7.4,0.02M的酸愛中液,加入0,1%的吐溫
20作為洗液。加入1/1000的?氮鋼后可長期保存
2.液全部完后,可將璃示版在桌子上平行経動30,混勻液に、也可以用時示的是
3、底物有一定的毒性,終止液對反膚有蝕性,應盡量造免接駛。
4、盈測前,要打開酶示儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上:
5、吸取液依時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
8、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使青洗更加底。沒有洗板機時,制去液體后,要將奪標板在振或毛紙上用力治干。
9、用槍吸取液時速度不能太俠,以兔產(chǎn)生氣泡而使吸取?不住確。
10、底物是光感的,要在臨用前現(xiàn)。

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