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小鼠ELISA試劑盒實驗中如何正確溫育

發(fā)表時間:2019-04-01

     從臨床應(yīng)用角度考核檢修試劑的可靠性,是以其能否區(qū)分健康與疾病的能力作為依據(jù)的。檢定內(nèi)容除包裝、標簽、說明書等外,對試劑的機能,如特異性、敏捷度、精密度和線性等均需逐項檢定,通過對一系列參比品的檢測,結(jié)果符合要求者才為合格。部臨檢中央對乙肝ELISA診斷試劑在這方面進行了工作,通過質(zhì)量評價,促進了試劑質(zhì)量的進步。進行這種評價,首先需要收集有關(guān)的病人血清,然后用公認的檢測該項標志物zui可靠的試劑進行測定,以確定其為陽性或陰性。目前還很難找到100%可靠的試驗,任何試驗都會泛起假陽性或假陰性。這一組表明測定物為陽性或陰性的血清組成"血清盤"(panel)。小鼠ELISA試劑盒實驗中如何正確溫育

    溫育是ELISA測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。 

    溫育這一步是臨床ELISA測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃ 30分鐘~1小時,進口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1~2小時才能有較完全的結(jié)合,低于1小時,可能會影響測定下限。因此,關(guān)于溫育,在實際測定操作中一定要注意以下幾點: 

    ELISA試劑盒要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。一般來說,加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時,孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需要一定的時間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時間可能還比較長,而在臨床實驗室中,很少有人注意這個問題,通常是將微孔板一放入恒溫箱即開始計時,這樣就很容易造成實際測定中溫育的時間不夠,弱陽性樣本測不出來的問題。 


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