流式細(xì)胞儀并非是完全自動化的儀器，準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果還需要準(zhǔn)確的人工技術(shù)配合，所以標(biāo)本制備需要規(guī)范，儀器本身亦需要質(zhì)量控制。

  流式細(xì)胞術(shù)免疫學(xué)檢測的影響因素和質(zhì)量控制

流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用，其免疫熒光染色的標(biāo)本制備非常重要，常常由于標(biāo)本制備過程中出現(xiàn)人為非特異性熒光干擾(尤其在間接免疫熒光染色中)或細(xì)胞濃度低等影響檢測結(jié)果。解決這些影響因素的方法如下：

(1) 確保標(biāo)本上機(jī)檢測前的濃度為1X106/ml，細(xì)胞濃度過低直接影響檢測結(jié)果。

(2) 使用蛋白封閉劑，封閉非特異結(jié)合位點(diǎn)，尤其在間接免疫熒光標(biāo)記時必不可少。常用的蛋白封閉劑為0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。

(3) 熒光抗體染色后充分洗滌，注意混勻和離心速度，減少重疊細(xì)胞和細(xì)胞碎片。

(4) 設(shè)置對照樣品，采用與抗體來源同型匹配的無關(guān)對照和熒光抗體的本底對照。

(5)判定結(jié)果時，應(yīng)注意減去本底熒光，為使免疫熒光的定量分析更精確，應(yīng)用計算機(jī)程序軟件，用擬合曲線方法從實(shí)驗(yàn)組的曲線峰值中減去對照組的曲線峰值，可以得到更準(zhǔn)確的免疫熒光定量結(jié)果。

(6) 注意染色后避光，保證細(xì)胞免疫熒光的穩(wěn)定。

   DNA倍體分析的質(zhì)量控制仍沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)， 各文獻(xiàn)報道的實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異較大，1993年10月美國癌癥研究組織制定了FCMDNA定的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，我們根據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合國內(nèi)有經(jīng)驗(yàn)的專家多年的實(shí)踐，對FCM的DNA分析技術(shù)的質(zhì)控和注意事項(xiàng)進(jìn)行說明。

(1) 手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本或活檢針吸標(biāo)本取材時，要避免出血壞死組織。

(2) 標(biāo)本采集后要及時固定或深低溫保存，以免組織發(fā)生自溶，DNA降解，而造成測試結(jié)果的誤差。

(3) 固定劑要采用對組織細(xì)胞穿透性強(qiáng)的濃度，70%的乙醇固定效果較好。

(4) 單細(xì)胞懸液制備過程中，注意將待測細(xì)胞成分分離出來，減少其他成分的干擾，并注意不要損傷該群細(xì)胞。

(5) 細(xì)胞樣品的采集要保證足夠的細(xì)胞濃度，即1X106/ml，雜質(zhì)、碎片、團(tuán)塊和重疊細(xì)胞應(yīng)<2%，對腫瘤細(xì)胞DNA異倍體的分析樣品，至少有20%的腫瘤細(xì)胞存在。

(6) 石蠟包埋組織單細(xì)胞制備時要注意：取材時應(yīng)選取無自溶、壞死的組織，對腫瘤組織標(biāo)本，選取含腫瘤細(xì)胞豐富的區(qū)域；石蠟組織片的厚度要適宜，**為40～50μm 。過薄或過厚的切片均會影響檢測結(jié)果；徹底脫蠟，以免殘留的石蠟影響酶的消化活性，驗(yàn)證脫蠟是否完全的方法是棄去二甲苯，加入100%乙醇，如果無絮狀物浮起，說明蠟已脫凈；水化要充分，使組織還原到與新鮮組織相似的狀態(tài)；注意消化的時間和消化酶的活性。常規(guī)使用0.5%胃蛋白酶，pH 1.5。